包膜氯化膽堿在人工體外模擬奶牛瘤胃、皺胃、小腸中溶出、釋放、吸收的效果評(píng)價(jià)

氯化膽堿屬于維生素類，其主要生理功能具有維持細(xì)胞結(jié)構(gòu)完整性,保證細(xì)胞膜通透性和生物信號(hào)傳導(dǎo)等方面發(fā)揮關(guān)鍵作用。

 

膽堿也是構(gòu)成磷脂的重要成分,參與骨骼和軟骨基質(zhì)的成熟過程；參與動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝，脂肪在肝臟被降解成脂肪酸和甘油,膽堿可以將脂肪酸與卵磷脂結(jié)合后轉(zhuǎn)運(yùn)出肝臟,避免脂肪在肝臟的大量沉積，可緩解脂肪肝的形成。

膽堿作為甲基供體參與蛋氨酸的合成，因而可節(jié)省體內(nèi)蛋氨酸中甲基團(tuán)的消耗，并在形成醋酸脂乙酸膽堿的情況下參與傳導(dǎo)神經(jīng)沖動(dòng)。

 

 

在奶牛特殊的的圍產(chǎn)期間，奶牛需要更多的膽堿來幫助肝臟處理多余的脂肪，讓甘油三酯能順利轉(zhuǎn)移出肝臟。

其意義在于減少肝臟脂肪的沉積和酮體的生成，能有效減少脂肪酸和酮體對(duì)組織和器官的損傷，使奶牛從泌乳期的開端到更高的峰值產(chǎn)奶量階段有一個(gè)平穩(wěn)的過渡，緩解機(jī)體糖-脂代謝紊亂，減少多種代謝性疾病的發(fā)生，如脂肪肝、酮病、繼發(fā)性疾病等，間接提高奶牛壽命和牧場(chǎng)經(jīng)濟(jì)效益。

 

 

目前市場(chǎng)上出售的氯化膽堿產(chǎn)品劑型主要有液體狀、粉狀和包膜狀?，F(xiàn)主要針對(duì)包膜氯化膽堿在奶牛圍產(chǎn)期中的應(yīng)用效果，設(shè)計(jì)包膜氯化膽堿人工體外模擬奶牛瘤胃、皺胃、小腸中的溶出、釋放、吸收分布情況的試驗(yàn)。

 

1.試驗(yàn)方案：取市售粉狀50%氯化膽堿（20210612）和50%包膜氯化膽堿（耀飛公司自產(chǎn)，20210628），分別進(jìn)行人工體外模擬奶牛瘤胃溶出度、皺胃釋放率、小腸中的吸收分布情況。

 

2.試驗(yàn)材料：50%氯化膽堿（硅型）、50%包膜氯化膽堿（奧特堿）、碳酸氫鈉、磷酸氫二鈉、氯化鈉、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、氯化鉀、稀鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液、甲基紅一亞甲基藍(lán)混合指示液、雷氏鹽甲醇溶液、磷酸氫二鉀、蛋白酶、胰脂肪酶、淀粉酶、玻璃砂芯坩堝、分析天平、電熱干燥箱、SHZ-82水浴恒溫振蕩器、超聲清洗器、電爐、真空泵、燒杯、滴定管、純化水等一般試驗(yàn)室試劑和儀器。

甲基紅一次甲基藍(lán)混合指示液

 

3.試驗(yàn)方法

3.1 瘤胃溶出率：準(zhǔn)確稱取對(duì)照組粉劑氯化膽堿和試驗(yàn)組包膜氯化膽堿各9份，每份2.5g，分別浸入50ml人工瘤胃液中（McDougall緩沖液），McDougall緩沖液：將7.43克碳酸氫鈉、7.00克磷酸二鈉12水合物、0.34克氯化鈉、0.43克氯化鉀、0.10克氯化鎂6水合物和0.05克氯化鈣溶解在1000毫升水。于39℃恒溫并搖晃2、4、6、8、10、12、16、20、24小時(shí)，分別分離過濾，測(cè)定濾液中膽堿含量與總量的比率。（過瘤胃保護(hù)率=100%-溶出率）

 

3.2 皺胃釋放率：準(zhǔn)確稱取對(duì)照組粉劑氯化膽堿和試驗(yàn)組包膜氯化膽堿各5份，每份2.5g，分別浸入50ml皺胃液相對(duì)的Clark-Lubs緩沖液中，Clark-Lubs緩沖液：將3.73克氯化鉀和2.1毫升鹽酸溶解在1000毫升水中而制成的溶液。然后于39℃恒溫?fù)u晃2、4、6、8、10小時(shí)，分別分離過濾，測(cè)定濾液中膽堿含量與總量的比例。
 

3.3 小腸釋吸收率：準(zhǔn)確稱取包膜膽堿5份各2.5g分別浸入小腸液相對(duì)的人工腸液（ph6.8）中，人工腸液：將6.8g磷酸氫二鉀溶解于500ml水中，加入0.25g胰蛋白酶、9.375g胰脂肪酶、83.3mg胰淀粉酶，并定容至1000ml，用0.1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)ph為6.8。然后于39℃恒溫?fù)u晃2、4、6、8、10小時(shí)后，分別過濾，測(cè)定濾液中膽堿含量與總量的比例。

 

3.4 氯化膽堿含量測(cè)定方法：精密量取續(xù)濾液10ml，置100ml高型燒杯中，加3ml氫氧化鈉溶液，蓋上表面皿，在電爐上加熱微沸5 min，冷卻，用水沖洗表面皿及燒杯壁。加1滴甲基紅一亞甲基藍(lán)混合指示液，用鹽酸溶液調(diào)至紫紅色(pH5-pH6)，于冰水浴中冷卻至5℃以下，繼續(xù)保持在冰水浴中，在攪拌下，緩慢滴加15 ml雷氏鹽甲醇溶液，繼續(xù)攪拌反應(yīng)30 min，再靜置陳化30 min。將沉淀轉(zhuǎn)移到預(yù)先已于(105士2)℃下干燥至質(zhì)量恒定的玻璃砂芯坩堝中，減壓抽濾、用水洗滌沉淀3~4次，每次用水約10ml。將裝有沉淀的玻璃砂芯坩堝移人(105士2)℃電熱千燥箱內(nèi)，干燥2h，取出。于干燥器內(nèi)冷卻至室溫，稱量。在測(cè)定的同時(shí)，按測(cè)定相同的步驟，對(duì)不加實(shí)驗(yàn)室樣品而使用相同數(shù)量的試劑溶液做空白試驗(yàn)。結(jié)果計(jì)算：

 

W1-W0

X%=—————×5×0.33045×100

M×N

式中：
W１--- 沉淀質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g);
W0--- 空白試驗(yàn)沉淀質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g);

M--- 試料質(zhì)量的數(shù)值，單位為克(g);

0.33045---氯化膽堿摩爾質(zhì)量與雷氏鹽-氯化膽堿沉淀產(chǎn)物摩爾質(zhì)量的比值

5--試料的稀釋倍數(shù)
N---包膜氯化膽堿的標(biāo)示含量

 

4.試驗(yàn)結(jié)果及評(píng)價(jià)：

根據(jù)檢測(cè)結(jié)果，普通氯化膽堿在瘤胃液中已完全溶出，活性成分已降解，不能到皺胃、小腸部位。而經(jīng)過嵌入式包被工藝的包膜氯化膽堿(奧特堿），在本試驗(yàn)條件下的過瘤胃保護(hù)率大于90%、皺胃液中釋放率小于10%，在小腸部位的吸收率大于97%。從而確保足量膽堿的活性成分在腸道中充分吸收利用。

 

5.試驗(yàn)小結(jié)：包膜氯化膽堿，可以減少脂肪肝，降低奶牛酮病的發(fā)生。促進(jìn)NEFT的完全氧化，抑制酮體生成；降低血液中的β-羥基丁酸含量，從而減少甘油三酯沉積和脂肪肝，減少奶牛酮病發(fā)生?？梢蕴岣吣膛．a(chǎn)奶品質(zhì)，延長(zhǎng)產(chǎn)奶高峰，促進(jìn)NEFT轉(zhuǎn)化為ATP，發(fā)揮產(chǎn)能作用，抑制能量負(fù)平衡的影響，增加泌乳能力。還可以提高乳脂、乳蛋白，減少蛋氨酸轉(zhuǎn)化為膽堿的消耗，從而更多用于乳蛋白的合成。


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